герб

ГОСТы

флаг

СанПиН 1437-76 Инструктивно-методические указания по устройству, эксплуатации и санитарному контролю плавательных бассейнов с морской водой

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР

ИНСТРУКТИВНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО УСТРОЙСТВУ, ЭКСПЛУАТАЦИИ И САНИТАРНОМУ
КОНТРОЛЮ ПЛАВАТЕЛЬНЫХ БАССЕЙНОВ
С МОРСКОЙ ВОДОЙ

Москва 1976 г.

Инструктивно-методические указания разработаны Институтом общей и коммунальной гигиены им. А.Н. Сысина АМН СССР (В.Г. Субботин, Т. З. Артемова, Т.А. Николаева, Л.Е. Корш, Ю.Г. Талаева, Р.М. Абиева, Ю.И. Немыря, А.Ф. Скворцов), Всесоюзным НИИ дезинфекции и стерилизации МЗ СССР (И.А. Малевская, Н.Ф. Соколова) при участии Академии коммунального хозяйства им. К.Д. Памфилова (В.М. Иванов) и проектного института “Южгипрокоммунстрой” (П.А. Зуев, Н.Г. Венгрисинен).

УТВЕРЖДАЮ

Заместитель Главного

Государственного санитарного

врача СССР

А.И. Заиченко

5 июля 1976 года

№ 1437-76

ИНСТРУКТИВНО-МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО УСТРОЙСТВУ, ЭКСПЛУАТАЦИИ И САНИТАРНОМУ
КОНТРОЛЮ ПЛАВАТЕЛЬНЫХ БАССЕЙНОВ
С МОРСКОЙ ВОДОЙ

Настоящие указания распространяются на проектирование, строительство, эксплуатацию и реконструкцию купально-плавательных и лечебных бассейнов с морской водой и водозаборы указанных сооружений.

Указания определяют основные принципы организации, эксплуатации и санитарного контроля плавательных бассейнов с морской водой и предназначены для обеспечения эпидемический безопасности и благоприятных санитарных условий оздоровительно-лечебного использования морских вод.

1. Требования к морской воде в местах водозаборов и бассейнах по санитарно-химическим и санитарно-микробиологическим показателям

1.1. Состав и свойства морской воды в местах водозаборов и бассейнах должны соответствовать следующим общим требованиям и нормативам:

Таблица 1

ОБЩИЕ ТРЕБОВАНИЯ И НОРМАТИВЫ СОСТАВА И СВОЙСТВ МОРСКОЙ ВОДЫ В МЕСТАХ ВОДОЗАБОРОВ И БАССЕЙНАХ

Показатели

Общие требования и нормативы

1

2

Плавающие примеси

Отсутствие необычных для морской воды плавающих веществ на поверхности и в толще воды (пленки, масляные пятна, включения и др. примеси)

Запах

Интенсивность необычных для морской воды запахов не должна превышать практического порога восприятия (2 балла).

Прозрачность1

Не менее 30 см по шрифту Снеллена

Окраска

Не допускается окраска морской воды в столбике воды 10 см

Биохимическая потребность воды в кислороде (БПК5)

Не должна превышать 3,0 мг/л О2 при 20 °С

Азот аммиака солевого2

Не более 0,5 мг/л

Общая соленость

Не допускается изменение естественного уровня общей солености морской воды

Вредные вещества3

Регламентируются в соответствии с перечнем разрабатываемых гигиенических нормативов для морских вод

Примечания:

1. В случаях, когда снижение прозрачности морской воды в местах водозаборов обусловлено местными гидрофизическими, топографо-гидрогеологическими и другими природно-климатическими факторами, величина ее не регламентируется.

2. Содержание в воде азота аммиака солевого определяется в бассейнах.

3. Предельнодопустимые концентрации (ПДК) вредных веществ, принятые в “Правилах охраны поверхностных вод от загрязнения сточными водами” № 1166-74, временно распространяются на водозаборы оздоровительно-лечебного использования морских вод впредь до разработки специальных нормативов для прибрежных вод морей.

1.2. Показатели эпидемической безопасности морской воды.

Косвенными показателями безопасности воды в эпидемическом отношении являются: в отношении возбудителей кишечных инфекций - бактерии группы кишечных палочек и энтерококки: В отношении возбудителей инфекций верхних дыхательных путей, кожных покровов и др. - стафилококки; общее микробное загрязнение оценивается по количеству бактерий в 1 мл воды.

Морская вода плавательных бассейнов считается безопасной в эпидемическом отношении при следующих значениях косвенных показателей (таблица 2):

Таблица 2

ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУ МОРСКОЙ ВОДЫ ПО САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМ ПОКАЗАТЕЛЯМ

Показатели

В местах водозаборов

В бассейнах

1

2

3

Количество бактерий группы кишечных палочек в 1 л воды (коли-индекс)

не более 100

не более 100

Количество энтерококков в 1 л воды (индекс энтерококков) при дополнительных исследованиях

не более 50

не более 10

Количество стафилококков в 1 л воды, растущих на плотной элективной среде и обладающих лецитиназной активностью (индекс стафилококков)

не регламентируется

не более 20

Количество сапрофитов в 1 мл при 37 °

не регламентируется

не более 100

Примечание: Возбудители инфекционных заболеваний не должны обнаруживаться в морской воде как исходной, так и воде бассейнов при периодическом контроле и контроле по эпидпоказаниям.

2. ТРЕБОВАНИЯ К ПРОЕКТИРОВАНИЮ И УСТРОЙСТВУ БАССЕЙНОВ

2.1. Требования к устройству водозаборов.

2.1.1. Заборы морской воды должны быть организованы на участках моря:

а) находящихся под влиянием каких-либо источников загрязнения - выпусков сточных вод, выносов рек, загрязнений от портов и причалов, ливневых выпусков, пляжей и др.;

б) наименее подверженных влиянию вторичного загрязнения при волнении моря.

Выбор места забора морских вод и конструкции водозаборного устройства должен производиться с учетом местной санитарной ситуации и качества морской воды в зоне будущего водозабора, а также с учетом прогноза изменения состава и свойств морской воды.

При этом качество морской воды в районе водозабора должно соответствовать требованиям п.п. 1.1. - 1.2.

Удаленность водозаборов от берега и их устройство определяются в каждом конкретном случае с учетом требований п.п. а, б.

2.1.2. Границы зоны санитарной охраны морского водозабора определяются в соответствии со СНиП 11-31-74 “Водоснабжение. Наружные сети и сооружения”. При этом ее границы по акватории во всех направлениях должны быть приняты не менее 200 м.

2.1.3. Оголовки водозаборов должны быть:

а) заглублены не менее чем на 2 м от уровня дна, для обеспечения забора морской воды из средних слоев, в меньшей мере подверженных влиянию загрязнений;

б) снабжены решетками с размерами отверстий предупреждающими попадание в водоводы посторонних предметов;

в) надежно укреплены, также как и водоемы, во избежание поломок и подсоса воды.

2.1.4. Должна предусматриваться замкнутая система водозаборов от оголовка до бассейна, исключающая промежуточные водоприемные колодцы, которые могут быть источником вторичного загрязнения.

2.1.5. При возобновлении подачи морской воды в бассейны после перерыва на срок более чем 4-5 часов должны быть предусмотрены специальные устройства для сброса в канализацию застойной воды из системы водоводов.

При остановке системы для ремонта и других работ, связанных с нарушением герметичности водоводов, должна быть предусмотрена возможность промывки системы до получения соответствия качества морской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2.

2.1.6. Сброс использованной воды из ванн и после промывки фильтров производится в канализацию в соответствии с требованиями СНиП 11-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормы проектирования” и СНиП 11-32-74 “Канализация. Наружные сети и сооружения”.

2.2. Требования к очистным сооружениям и обеззараживанию морской воды.

2.2.1. При проектировании и строительстве плавательных бассейнов с морской водой должны предусматриваться очистные сооружения и устройства для обеззараживания морской воды.

2.2.2. В качестве очистных сооружений должны быть предусмотрены скорые напорные фильтры или микрофильтры.

В период постоянной эксплуатации бассейна должна производиться промывка фильтров не реже 1 раза в 3 суток. Учет промывки фильтров регистрируется в специальном журнале ответственным исполнителем и врачом бассейна.

2.2.3. При несоответствии морской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2. в качестве основного метода обеззараживания воды рекомендуется хлорирование.* **

Примечание: * По согласованию с органами санитарно-эпидемиологической службы допускается применение безреагентных способов обеззараживания морской воды и электролизных установок с применением дезинфектантов, получаемых при электролизе поваренной соли или морской воды.

** При несоответствии качества морской воды требованиям п.п. 1.1. и по согласованию с органами санитарно-эпидемиологической службы допускается применение окислителей для деструкции вредных химических веществ и улучшения органолептических свойств воды.

Обеззараживание воды осуществляется путем введения перед фильтрами концентрированных растворов дезинфектантов.

2.2.4. Для обеззараживания воды могут быть применены газообразный хлор, двутретьосновная соль гипохлорита кальция (45 - 52% активного хлора), натриевая соль дихлоризоциануровой кислоты (55 - 59% активного хлора), гипохлорит лития (50 - 60 % активного хлора).

2.2.5. Обеззараживание морской воды производится в соответствии с “Инструкцией по контролю за обеззараживанием хозяйственно-питьевой воды и за дезинфекцией водопроводных сооружений хлором при централизованном и местном водоснабжении” № 723а-67.

Вводимая при заполнении бассейна доза хлора устанавливается опытным путем с учетом хлоропоглощаемости морской воды. Постоянная концентрация остаточного хлора в воде ванн бассейна, в период эксплуатации, должна поддерживаться на уровне 0,2 - 0,4 мг/л.

2.2.6. Контроль за содержанием остаточного хлора в воде обеспечивается обслуживающим персоналом бассейна каждые 2 часа с записью результатов в журнале.

2.2.7. Очистка и обеззараживание морской воды не должны ухудшать ее бальнеологических свойств.

2.3. Требования к технологическим схемам водообмена и санитарно-техническому оборудованию.

2.3.1. При проектировании за основу должны быть приняты проточные схемы водообмена в бассейнах, как наиболее целесообразные в гигиеническим отношении. Рециркуляционные схемы с многократным использованием морской воды не рекомендуются.

Выбор типов сооружений (открытые, закрытые бассейны и др.) определяется конкретными природно-климатическими условиями.

2.3.2. Величина водообмена в бассейнах должна определяться с учетом:

а) обеспечения соответствия качества морской воды требованиям п.п. 1.1. - 1.2.;

б) интенсивности нагрузки купающихся на бассейн;

в) обеспечения заданной температуры воды в ванне бассейна.

Расчетные соотношения и исходные данные приведены в таблице 3.

Таблица 3

ИСХОДНЫЕ ДАННЫЕ РАСЧЕТОВ ОБЪЕМА ВАНН БАССЕЙНОВ.
ВЕЛИЧИНЫ НАГРУЗКИ КУПАЮЩИХСЯ И КРАТНОСТИ ВОДООБМЕНА.

Объем воды в ванне на 1 купающегося человека в сутки (м3)

Объем чистой воды, подаваемой на 1 человека (м3)

Водообмен (в %) к общему объему воды в ванне

6-7

1

Не менее 20

5

1,5

Не менее 30

4

2

Не менее 50

3

2

Не менее 75

2

2

Не менее 100

1

2

Не менее 200

2.3.3. Температура морской воды в бассейнах должна поддерживаться в соответствии с требованиями СНиП 11-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормы проектирования”, т.е. при открытом типе бассейна - не более 28 ° С, при закрытом типе бассейна - не более 26 ° С*.

* Примечание: 1. В лечебных бассейнах и ваннах температура морской воды определяется конкретными целями лечебного процесса, но не должна превышать 35 °С во избежание ухудшения органолептических свойств воды.

2.3.4. Рекомендуемые условия водообмена (п. 2.3.2.) должны обеспечиваться в процессе купания. При этом должен быть предусмотрен слив воды через поверхностные водосливы или пенные корытца, для удаления наиболее загрязненных порций воды, поверхностной пленки и других плавающих примесей.

С учетом ночного перерыва в эксплуатации бассейна и отстоя воды в течение 12 часов; до начала купания, должно быть предусмотрено удаление придонного слоя воды и осадка путем сброса 10 % от общего объема воды через донные водосливы и добавления порций свежей воды до перелива через пенные корытца.

2.3.5. При выборе типа устройства переливного желоба (пенного корытца) предпочтение должно быть отдано вариантам устройств с бортами, выступающими над уровнем воды.

2.3.6. При проектировании систем трубопроводов для подачи морской воды в бассейны должны быть предусмотрены:

а) специальные отводы и краны для отбора проб на анализ исходной морской воды, воды после очистных сооружений и обеззараживающих установок, а также после нагрева;

б) водомеры, позволяющие учитывать количество морской воды, подаваемой в ванну бассейна;

в) термометры для контроля температуры воды, подаваемой в бассейн и температуры нагрева воды на водонагревательных установках.

2.3.7. Основные требования к устройству бассейнов (месторасположение, требования к земельным участкам, планировочным решениям зданий и сооружений, естественному и искусственному освещению; противопожарные требования, санитарно-технические устройства, в том числе отопление, вентиляция, водоснабжение и канализация) должны соответствовать СНиП II-Л.11-70 “Спортивные сооружения. Нормы проектирования”.

3. Требования к санитарному режиму бассейнов

3.1. Регламентация нагрузки купающихся в бассейнах осуществляется в соответствии с принятой в проекте расчетной нагрузкой согласно п. 2.3.2.

3.2. Единовременная пропускная способность бассейнов определяется исходя из размеров поверхности зеркала воды (не менее 7 м2 поверхности на человека).

3.3. Периодически должен проводиться санитарный день, в течение которого производится полный слив воды из бассейна, санитарная обработка ванны, включающая механическую чистку, мытье, дезинфекцию и промывание водопроводной водой.

3.4. Периодичность санитарных дней определяется в каждом конкретном случае органами санитарно-эпидемиологической службы, с учетом нагрузки купающихся, интенсивности водообмена, качества морской воды в бассейне, санитарной ситуации водозабора и других факторов, но не реже 1 раза в месяц.

3.5. Все помещения бассейна должны ежедневно подвергаться тщательной уборке.

В зале бассейна стены должны протираться не реже 3-х раз в неделю; в санитарный день стены и полы следует обмывать сильной струей водопроводной воды из шланга. При этом должно быть исключено попадание сливной воды в ванну бассейна.

В подсобных помещениях, помимо ежедневной влажной уборки не реже 2-х раз в неделю, необходимо производить мытье полов горячей водой, промывку мебели в раздевальных комнатах и т.п.

3.6. Дезинфекцию бассейна проводят при каждом опорожнении ванны. При наличии эпидпоказаний, бассейн должен быть закрыт для проведения обеззараживания ванны, независимо от срока проведения предыдущей дезинфекции.

До проведения дезинфекции ванну бассейна тщательно чистят щетками и моют мыльно-содовым раствором с последующим смыванием горячей водой из шланга.

Для дезинфекции ванны применяют 5 % раствор хлорамина (Б или ХБ) или 2-2,5 % осветленный раствор хлорной извести (температура 18 - 22 ° ) при двухкратном орошении с нормой расхода 0,6 - 0,8 л/м2. Смыв дезинфицирующего раствора производят не ранее чем через час после нанесения.

3.7. Текущую дезинфекцию в помещениях бассейна осуществляют одновременно с их ежедневной уборкой. Дезинфекции подлежат: обходные дорожки, полы, скамейки, коврики, дверные ручки, поручни. Дезинфекцию проводят протирая ветошью, смоченной 0,2 - 0,3 % осветленным раствором хлорной извести, 0,5 - 1 % раствором хлорамина или 3 % раствором ниртана.

3.8. Периодическую дезинфекцию стен (до уровня не менее 2 м), полов в зале бассейна и подсобных помещений, а также предметов, указанных в п. 3.7. проводят как заключительную стадию генеральной уборки, используя растворы, перечисленные в п. 3.7. в санитарные дни, когда опорожняется ванна.

3.9. Хранение запасов дезвеществ, приготовление рабочих растворов дезинфектантов и работа с ними производится в соответствии с “Инструкцией по контролю за обеззараживанием хозяйственно-питьевой воды и за дезинфекцией водопроводных сооружений хлором при централизованном и местном водоснабжении” № 723а-67 и “Инструкцией по применению двутретиосновной соли гипохлорита кальция для дезинфекции № 826а-69.

3.10. Правила пользования бассейнами должны предусматривать:

а) общий медицинский осмотр и обследование на туберкулез обслуживающего персонала и тренеров при поступлении на работу и в дальнейшем не реже 1 раза в год;

б) обследование на кожно-венерические заболевания обслуживающего персонала и тренеров (осмотр дерматовенерологом, исследование крови на РВ и мазка на гонококк) при поступлении на работу, с последующим осмотром дерматовенерологом и исследованием мазка на гонококк не реже 1 раза в квартал и анализом крови на РВ не реже 1 раза в год;

в) купание только в купальных костюмах (купальники, плавки, шапочка), которые после каждого употребления подлежат стирке. Непосредственно перед одеванием после душа, купальный костюм должен быть промыт горячей водой в душевой;

г) обязательную дезинфекцию, стирку, глажение после купания костюмов, выдаваемых напрокат и выдачу их в запломбированном виде;

д) запрещение посещения бассейна лицам с кожными и грибковыми заболеваниями;

е) повторный медицинский осмотр лиц, пользующихся бассейном не реже одного раза в квартал;

ж) запрещение входа в бассейн лиц в обычной одежде и обуви.

3.11. Правила личной гигиены купающихся должны предусматривать:

а) обязательное прохождение медицинского осмотра;

б) обязательный душ с мылом без купальника и плавок;

в) проточный ножной душ при выходе из душевых кабин к ванне бассейна.

Посетители бассейна должны быть ознакомлены с правилами посещения бассейна и купания в нем.

Выполнение правил пользования бассейнами и соблюдение правил личной гигиены купающимися, должно строго контролироваться обслуживающим персоналом бассейна.

4. Организация контроля качества морской воды в бассейнах

4.1. Контроль качества морской воды в бассейнах должен осуществляться организацией, эксплуатирующей бассейн. Данные лабораторного анализа воды должны регистрироваться в специальном журнале.

4.2. Контролю подлежит вода в местах водозабора, в процессе ее очистки и обеззараживания, перед поступлением в бассейн и в ванне бассейна.

4.3. Частота и объем анализов и места отбора проб при осуществлении текущего контроля, определяются в соответствии с таблицей 4.

Таблица 4

ЧАСТОТА ОТБОРА ПРОБ И ОБЪЕМ АНАЛИЗОВ

Место отбора

Периодичность

Показатели

В бассейне (на сливе)

Не реже 2-х раз в неделю

Плавающие примеси, запахи, прозрачность, окраска (цветность), азот солевого аммиака, коли-индекс, индекс стафилококков, общее количество бактерий в 1 мл

В водоводах перед подачей морской воды в бассейн при водообмене

Не реже 2-х раз в неделю

Коли-индекс, запах, прозрачность, окраска (цветность)

Единовременно:
в местах водозабора, на этапах очистки и обеззараживания, перед подачей морской воды в бассейны и в ванне бассейна

Не реже 2-х раз в месяц

По всем показателям, указанным в п.п. 1.1 . - 1.2 .*

* Примечание:

а) Индекс стафилококков следует определять только в воде бассейнов.

б) Контроль за температурой воды в бассейне должен осуществляться через каждые 2 часа в период эксплуатации.

4.4. В момент заполнения бассейна должен быть произведен анализ исходной воды и воды в заполненном бассейне до купания, для определения соответствия ее состава и свойств требованиям, изложенным в пп. 1.1. - 1.2.

4.5. Для контроля работы очистных сооружений пробы следует отбирать непосредственно из водоводов и после очистных сооружений из специально оборудованных для этих целей отводов и кранов. Отбор проб следует производить с таким расчетом, чтобы отобрать наиболее загрязненные порции воды (на сливе и в конце утреннего купания или в конце рабочего дня, когда вода в бассейне хорошо перемешана).

При обнаружении бактериального загрязнения свыше нормативных величин, приведенных в п. 1.2. (таблица 2), с целью выявления причин загрязнения повторно производится отбор проб с дополнительным определением индекса энтерококков и показателей наличия свежего фекального загрязнения (качественно).

4.6. Органами санитарно-эпидемиологической службы периодически (не реже 1 раза в квартал) и чаще по эпидпоказаниям осуществляется контроль за качеством морской воды в местах водозаборов, перед поступлением воды в бассейны (после очистки и обеззараживания) и в ваннах бассейнов.

4.7. Пробы воды для бактериологического анализа отбирают с соблюдением правил стерильности согласно ГОСТ 18963-73.

Пробы воды для химического анализа отбирают в чисто вымытые, сполоснутые дистиллированной водой и высушенные стеклянные емкости.

4.8. Отбор проб воды для бактериологического анализа производится из кранов на трубопроводах после предварительной стерилизации кранов обжиганием пламенем горящего тампона, смоченного спиртом и последующего спуска воды в течение 5-10 мин.

4.9. Отобранные пробы должны сопровождаться документом, содержащим:

- точное наименование места отбора пробы;

- дату отбора пробы с указанием года, месяца, числа и часа;

- температуру отобранной воды;

- количество человек, искупавшихся за время после санитарного дня и смены воды в бассейне;

- внешний вид воды в бассейне, окраска (цветность), прозрачность, опалесценция и т.п.;

- особые обстоятельства, имевшие место при отборе и транспортировке проб воды.

Сопроводительный документ должен быть подписан лицом, отбиравшим пробы, с указанием места работы и должности.

4.10. Бактериологический анализ отобранной пробы должен быть произведен не позднее чем через час после отбора. При невозможности исследования пробы на месте, допускается транспортировка проб в пределах 1 - 3 часов.

Санитарно-химические исследования должны быть выполнены в течение 8 часов с момента отбора.

4.11. Коли-индекс и общее количество сапрофитов в 1 мл определяют в соответствии с ГОСТ 18963-73 “Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа”. Методы определения индексов энтерококков и стафилококков приведены в приложении.

Патогенные микроорганизмы определяют в соответствии с “Инструктивно-методическими указаниями по обнаружению в воде возбудителей кишечных инфекций бактериальной и вирусной природы” № 1150-74.

4.12. Санитарно-химические исследования производят методами, принятыми для анализа морских и высокоминерализованных вод.

Приложение

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛЕЦИТИНАЗОАКТИВНЫХ СТАФИЛОКОККОВ

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема анализируемой воды на мембранные фильтры, выращивании их при 37 ± 0,5 ° С на желточно-молочно-солевом агаре (ЖМСА) с полимиксином, подсчете лецитиназоактивных стафилококков.

Через мембранные фильтры профильтровывают 50 мл воды с таким расчетом, чтобы выросли изолированные колонии (например, 5 мл, 20 мл, 25 мл). Фильтры помещают на ЖМСА с полимиксином, не содержащий на поверхности следов влаги, выращивают при 37 ± 0,5 ° С 20-24 часа. На эту среду при большом загрязнении стафилококками можно делать прямые посевы 1 мл и меньших объемов.

Подсчитывают количество выпуклых блестящих колоний, которые образовали характерный пигмент (золотистый, палевый, лимонно-желтый, реже белый) и радужную зону вокруг.

При необходимости подтвердить наличие стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, подозрительные колонии пересевают “пятнами” на чашки, разделенные на квадраты, со средой того же состава, отмечают пигментообразование, радужную зону разложения желтка и зону помутнения, характерную для стафилококков форму клеток при микроскопировании.

При отсутствии мембранных фильтров можно определить стафилококки титрационным методом, используя в качестве среды накопления солевой бульон. Схема посева должна соответствовать таблице 1 ГОСТ 18693-73, по которой определяют индекс стафилококков. Высев из сред накопления делают на ЖМСА с полимиксином, отмечая наличие лецитиназоактивных стафилококков.

Желточно-молочно-солевой агар (ЖМСА).

Сухой питательный агар - 55 г.

( дагестанского НИИ питательных сред).

Натрий хлористый - 90 г.

Дистиллированная вода до 1000 мл.

Расплавляют при нагревании, разливают мерно в сосуды и стерилизуют при 120 ± 2 ° С (1,1 кгс/см2) 20 мин.

Перед употреблением, в расплавленный и охлажденный до 50-55 ° солевой агар добавляют (из расчета на 100 мл среды) стерильное обезжиренное молоко - 6 мл.

Один яичный желток, тщательно смешанный с 50 мл физиологического раствора с помощью стеклянных бус - 10 мл.

Полимиксин М (раствор хранить не более 14 дней) - 30000 ЕД.

Тщательно смешивают и разливают в чашки Петри толстым слоем по 20-25 мл для выращивания бактерий на мембранных фильтрах и тонким слоем по 15 мл для подтверждающего этапа.

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭНТЕРОКОККОВ В МОРСКОЙ ВОДЕ

Индекс энтерококков может быть определен методом мембранных фильтров или титрационным методом.

Метод мембранных фильтров

Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема анализируемой воды на мембранный фильтр, выращивании их на элективных средах при 37 ± 0,5 ° С, дифференцировании выросших колоний и подсчете количества энтерококков.

Через мембранные фильтры профильтровывают:

- при исследовании воды бассейна - не менее 100 мл;

- при исследовании воды у водозабора - не менее 20 мл, с таким расчетом, чтобы на каждом из фильтров выросли изолированные колонии в количестве не более 50. При выборе объема ориентируются на результаты предыдущих исследований. (Например, для воды бассейнов могут быть выбраны следующие объемы: 10, 40, 50 мл; для воды у водозабора - 1, 5, 15 мл).

Фильтры помещают на элективную среду (Сланеца - Бертли или Турчинского) и выращивают при 37 ± 0,5 ° С 24 часа.

Учет результатов

Подсчитывают колонии разной окраски и величины. По 3-4 колонии каждого типа пересевают секторами на чешки с подтверждающей средой (по 8-10 секторов на одну чашку). Рост на этой среде и характерная морфология клеток при микроскопии (полиморфные, как правило, слегка вытянутые диплококки) позволяет отнести такого типа колонии к энтерококкам. Для вычисления индекса энтерококков количество таких колоний в исследуемом объекте умножают на 1000 мл и делят на этот объем, соблюдая условия, оговоренные в п. 4.2.13 ГОСТа 18963-73 при вычислении коли-индекса.

Обильный рост колоний, редуцирующих ТТХ, т.е. с малиново-вишневым оттенком, свидетельствуют о наличии в воде Str. faecalis - показателя свежего фекального загрязнения.

При работе на среде Турчинского после выращивания колоний непосредственно на мембранном фильтре выполняют каталазный тест путем нанесения петлей капли перекиси водорода на несколько колоний каждого типа. При образовании пузырьков газа такие колонии из учета исключают. Пересевают на подтверждающую среду только колонии, не обладающие каталазной активностью.

Среда Сланеца-Бертли (модификация)

Сухой питательный агар - 40 г.

(Дагестанского НИИ питательных сред)

Калий фосфорнокислый однозамещенный - 4 г.

Дистиллированная вода - до 1000 мл.

Расплавить при нагревании, установить рН 7,0, разлить мерно в сосуды, стерилизовать при 120 ± 2 ° С (1,1 кгс/см2) 20 мин.

Перед употреблением в расплавленный и слегка остуженный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 0,4 г.

Азид натрия - 0,04 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1 мл.

Полимиксин М

(срок хранения раствора не более 14 дней) - 30000 ед.

Тщательно смешать, исправить рН - 6,9, разлить в чашки толстым слоем по 20-25 мл. Хранить в холодильнике не более 3-х суток.

Среда Турчинского

Дистиллированная вода - 600 мл.

Желчь крупного рогатого скота - 400 мл.

Сухой питательный агар Дагестанского НИИ питательных сред - 35-40г.

Калий фосфорнокислый двузамещенный - 5 г.

Калий фосфорнокислый однозамещенный - 5 г.

Натрий-аммоний фосфорнокислый - 5 г.

Расплавить при нагревании, установить рН 7,2 - 7,4, разлить мерно в сосуды, простерилизовать при 120 ± 2 ° С (1,1 кгс/см2) 20 мин.

Перед употреблением в расплавленный и слегка охлажденный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 0,5 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1 мл.

1 % водный раствор метиленового синего

(хранить не более 14 дней) - 0,6 мл

Полимиксин - 30000 ед.

Фурациллин (0,1 % спиртовой раствор) - 1,2 мл.

Тщательно смешать, разлить в чашки толстым слоем по 20-25 мл. Хранить в холодильнике не более 3-х суток.

Подтверждающая среда

Сухой питательный агар Дагестанского НИИ питательных сред - 50 г.

Натрий хлористый - 65 г.

Вода дистиллированная - 1000 мл.

Расплавить при нагревании, установить рН 6,2 разлить мерно в сосуды, простерилизовать при 120 ± 2 ° С (1,1 кгс/см2) 30 мин.

Перед употреблением в растопленный агар добавить из расчета на 100 мл среды:

Глюкозы - 1 г.

ТТХ (1 % водный раствор) - 1 мл.

Кристаллических фиолетовый (0,01 % водный раствор) - 1,25 мл.

Полимиксин - 30000 ед.

Тщательно смешать, разлить в чашки. Хранить в холодильнике не более 3-х суток.

Титрационный метод

Титрационный метод менее точен, чем метод мембранных фильтров, однако при их отсутствии может быть рекомендован для использования.

Для определения количества энтерококков можно воспользоваться посевами в глюкозо-пептонную среду накопления, которые были сделаны для определения бактерий группы кишечных палочек. (Глюкозо-пептонную среду в этих случаях следует готовить без индикатора бромтимолблау).

Из сосудов, где отмечены признаки роста, делают высев одновременно на среду Эндо и на сектора среды Сланеца-Бертли, (по 6 секторов). Рост на секторах среды Сланеца-Бертли указывает на наличие энтерококков. При необходимости наличие энтерококков подтверждают микроскопией выросших колоний.

Индекс энтерококков рассчитывают по таблице 1 ГОСТ 18963-73.

При отсутствии азида натрия допустимо использовать в качестве подтверждающих другие среды (Туринского, молочно-ингибиторную). Среды без азида натрия менее элективны в отношении посторонней кокковой микрофлоры, поэтому необходима более тщательная идентификация выросших колоний (Каталазный тест и микроскопия).

На сектора необходимо делать массивный высев большой петли материала из сред накопления. В то же время, к концу штриха должны быть получены изолированные колонии, иначе более грубый рост посторонних бактерий будет маскировать единичные нежные колонии энтерококков.

Каталазный тест можно выполнять на предметном стекле, нанося испытуемую культуру большой точкой. Слегка подсушив препарат на воздухе, накапывают петлей перекись водорода. Положительный каталазный тест отмечают при образовании пузырьков газа, наблюдаемых с лупой или с помощью вогнутого зеркала.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Требования к морской воде в местах водозаборов и бассейнах по санитарно-химическим и санитарно-микробиологическим показателям .. 1

2. Требования к проектированию и устройству бассейнов . 2

3. Требования к санитарному режиму бассейнов . 4

4. Организация контроля качества морской воды в бассейнах . 5

Приложение . 6

Метод определения лецитиназоактивных стафилококков . 6

Метод определения энтерококков в морской воде . 6

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Гост 11738 Гост 14034 74 Гост 1491 80 Гост р 12 2 143 2009 Гост сетки арматурные сварные Должностные инструкции в строительстве Извещение об изменении Инструкция и 1 13 07 Лестничные марши гост Обозначение Приборов кип Пдк Расход электроэнергии Расчет системы отопления Расчет теплопотерь здания Сортамент Двутавров с параллельными гранями полок