герб

ГОСТы

флаг

МУК 4.2.1782-03 Метод микробиологического измерения концентрации клеток Candida tropicalis Y-456 - продуцента ксилита в воздухе рабочей зоны

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

Государственные санитарно-эпидемиологические
правила и гигиенические нормативы

4.2 . МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма
Candida tropicalis Y -456 - продуцента ксилита
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1782-03

МИНЗДРАВ РОССИИ

МОСКВА 2004

Методические указания. - М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.

1 . Разработаны: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И. Шеиной).

2 . Утверждены Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 24 октября 2003 г.

3 . Введены в действие с 1 декабря 2003 г.

4 . Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный санитарный

врач Российской Федерации,

Первый заместитель Министра

здравоохранения Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

24 октября 2003 г.

Дата введения: 1 декабря 2003 г.

4.2 . МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации

клеток микроорганизма Candida tropicalis Y -456 - продуцента ксилита

в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1782-03

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Candida tropicalis Y -456 - продуцента ксилита в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

Методические указания одобрены и рекомендованы секцией «Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды» Проблемной комиссии «Научные основы гигиены окружающей среды».

2. Биологическая характеристика Candida tropicalis Y-456 и его гигиенический норматив

На сусло-агаре на 2 - 3 сутки штамм образует круглые кремоватые колонии с ровным краем, средний диаметр изолированных колоний составляет 0,3 см, а максимальный - 0,8 см. В центре колоний образуется небольшое возвышение - «бугорок», на среде появляется маленькое желто-оранжевое окрашивание. Консистенция колоний мягкая, неплотная, вязкая. Поверхность гладкая, слегка матовая.

Морфологически штамм представлен полиморфными клетками: округлые, овальные, большей частью одиночные 2 - 4 мкм, иногда цепочки или конгломераты из вытянутых клеток 10 - 12 мкм. Наблюдается обилие бластоспор.

При выращивании на кукурузном агаре по Дальмау в чашках Петри обильно образуются с многократными разветвлениями и бластоконидиями, расположенными одиночно или цепочками вдоль гиф (7).

Систематическое положение микроорганизма.

Класс                                          Fungi imperfecti

Порядок                                      Blastomycetales

Род                                              Candida

Вид                                              tropicalis

Штамм                                        Y -456

Штамм получен из ЦМПМ ВНИИгенетика как продуцент этанола и селектирован по признаку формирования крупных колоний на средах с ксилозой. Штамм является продуцентом ксилита. Продуктивность на средах с 5 % содержанием ксилозы: максимальная - 80 % ксилита, средняя - 78,8 - 76,2 % (39,5 г/л) ксилита.

Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 35 - 37 °С, рН среды - 5,0 - 6,0. Для размножения используется сусло-агар 5 - 6 °Б, среда ДАП - глюкоза (ксилоза) - 20 г, дрожжевой экстракт - 2,0 г, пептон - 2 г, агар-агар - 20 г, вода - 1 л, рН среды - 5,0 - 6,0.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 300 кл./м3, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам на 2 сутки. В качестве дополнительного контроля предлагается отбор пробы на чашку Петри с селективной средой для дифференцирования С. tropicalis от других дрожжеподобных грибов, обладающих способностью к образованию ростковых трубок (8 , 9).

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1 . Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа

воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                    ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные

или водяные

Автоклав электрический                                                          ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной

системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением ´ 10                                                          ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические

плоскодонные, стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью

20 и 35 мл                                                                                   ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                              ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                              ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                   ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                    ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                      ГОСТ 25556-81

5.2 . Реактивы, растворы

Среда сусло-агар: солодовое сусло (значение

Баллинга от 5 до 6°) - 98 %, агар-агар - 2 %,

рН среды 5,0 - 6,0, режим стерилизации

1 ,1 - 1,2 ати, 40 мин

Спирт этиловый ректификат                                                   ГОСТ 5962-67

Антибиотик биомицин (хлортетрациклина

гидрохлорид)

Сыворотка или плазма крови человека

(вместо них можно использовать среду 199)

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.

6.1 . Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88 .

6.2 . Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

6.3 . Руководство «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980), «Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

6.4 . Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5 °С), атмосферном давлении 630 - 800 мм рт.ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерения

9.1 . Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2 . Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 2 сутки после посева проб воздуха по культурально-морфологическим признакам. Метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50 - 60 °С, добавляют антибиотик биомицин из расчета 100 мг/л (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.

Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 37 °С. Через 2 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

Для постановки дополнительного контроля в среду добавляют сыворотку или плазму крови человека (можно также заменить средой 199 ) из расчета 0,5 мл сыворотки на 5 мл среды. После отбора проб инкубируют при 37 °С в течение 3 часов. При микроскопировании некоторые дрожжеподобные грибы (С. albicans ) в отличие от С. tropicalis на селективной среде образуют ростковые трубки диаметром 3 - 4 мкм и длиной до 20 мкм (они сходны с мицелием, но не дают сужения в месте прикрепления к дрожжевой клетке).

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:

 кл./м3, где

Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Candida tropicalis Y -456 в воздухе рабочей зоны

1. Дата проведения анализа ___________________________________________________

2. Место отбора пробы _______________________________________________________

3. Название лаборатории _____________________________________________________

4. Юридический адрес организации ____________________________________________

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл./м3

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1 . ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2 . ГОСТ 8.563-96 . ГСИ «Методики выполнения измерений».

3 . Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. - М., 1980. 27 с.

4 . Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. - М., 1977. 7 с.

5 . Влодавец В.В., Немыря В.И. Санитарно-микологический контроль объектов окружающей среды на предприятиях микробиологической промышленности // Гиг. и сан., 1977. № 1. С. 25 - 28.

6 . Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. - М.: МГУ. С. 332.

7 . Саттон Д., Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и условно патогенных грибов. - М.: Мир, 2001. 110 с.

8 . Кашкин П.Н., Лисин В.В. Практическое руководство по медицинской микологии. - М.: Медицина, 1983. 153 с .

9 . Kwon-Chung K.J., Bennett J.E. Medical mycology. Philadelphia: Lea & Febiger, 1992. P . 61 - 62.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения . 1

2. Биологическая характеристика Candida tropicalis Y-456 и его гигиенический норматив . 2

3. Пределы измерений . 2

4. Метод измерений . 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы .. 3

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы .. 3

5.2. Реактивы, растворы .. 3

6. Требования безопасности . 3

7. Требования к квалификации операторов . 4

8. Условия измерений . 4

9. Проведение измерения . 4

9.1. Условия отбора проб воздуха . 4

9.2. Выполнение анализа . 4

10. Вычисление результатов измерения . 4

11. Оформление результатов измерений . 5

Список литературы .. 5

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Гост 12820 80 Гост 520 89 Гост 8328 75 Гост 9833 73 Гост р 21 1101 2009 Гост р 6 30 2003 Квалификационный справочник должностей Коэффициент уплотнения щебня Позиционный допуск Пуэ Размеры дорожных знаков Размеры под ключ гост Расход топлива Расчет экономической эффективности Усадка песка при уплотнении