герб

ГОСТы

флаг

МУК 4.2.1072-01 Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK -1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1072-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к. б. н. Бару Р. В., к. б. н. Лапчинской А. В. (Государственный научный центр по антибиотикам).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения . 2

2. Характеристика штамма-продуцента Вермикулена . 2

3. Пределы измерений . 2

4. Метод измерений . 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы .. 2

6. Требования безопасности . 3

7. Требования к квалификации операторов . 3

8. Условия измерений . 3

9. Проведение измерения . 3

10. Вычисление результатов измерения . 4

11. Оформление результатов измерений . 5

Список литературы .. 5

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1072-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK -1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны

Методические указания

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium vermiculatum PK -1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма-продуцента Вермикулена

Микроорганизм Penicillium vermiculatum PK-1 является продуцентом Вермикулена. Биологический препарат Вермикулен представляет собой живую культуру (споры и мицелиальная масса микроорганизма Penicillium vermiculatum PK - l ).

Penicillium vermiculatum PK-1 - аэроб, растет на жидких и агаризованных средах, оптимальная температура роста 25-30 °С, оптимальная рН от 5 до 8. Наиболее интенсивный рост гриба отмечается на картофельно-сахарозном агаре и агаризованной среде Чапека. На среде Чапека-Докса при культивировании при температуре 25 °С на 2-3 сутки образуются небольшие (2-5 мм в диаметре) округлые бархатистые колонии желто-бежеватого цвета, с обратной стороной от светло- до темнооливкового. Репродуктивными органами микроорганизма являются споры (конидии и обрывки мицелия).

ПДКр.з - 5000 кл/м3

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 30000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента Вермикулена на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                                 ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                                                                 ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х 10                                                                                                                 ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                                 ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                                                                                 ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                                                                                 ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                                 ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                                 ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                     ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                   ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                      ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Антибиотики группы аминогликозидов (канамицин, неомицин и др.)

Спирт этиловый ректификат                                                                                                               ГОСТ 5962-67

Селективная среда Чапека-Докса для штамма-продуцента: NaNO 3 - 3,0 г; MgSO 4 K 2 HPO 4 - 1,0 г; KCL - 0,5 г; MgS O 4 × 7Н2 O - 0,5 г; FeSO 4 × 7Н2 O - 0,01 г; сахароза - 30 г; агар - 20 г; вода дистиллированная - до 1000 мл; рН - 6,0; стерилизация при 121 ° С; 30 мин.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны соблюдают:

· правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

· правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

· требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

· положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерения

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения продуцента Вермикулена воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 2-3 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотика (канамицин, неомицин) из расчета 25-50 мкг на 1 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10-15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 25 °С. Через 48-72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

10. Вычисление результатов измерения

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:

 кл/м3, где

Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

В случае невозможности использования аппарата Кротова, рекомендуется применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 60 мин (при определении концентрации микроорганизма в атмосферном воздухе). При использовании этого метода пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента:

эмпирически установлено, что за 5 мин на площадь 100 см2 оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, за 1 мин - в 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 см2.

Составляем пропорцию:

     на 100 см2 за 1 мин оседает 2 л воздуха

     на 78,54 см2    -    Х л

                        Х= 1,57 л/мин.

Следовательно, на стеклянную чашку Петри за 1 мин оседает 1,57 л воздуха.

Надо определить количество клеток в 1 м3 воздуха.

На 1 чашку (диаметр 100 мм) за 1 мин оседает количество микробов, содержащихся в 1,57 л воздуха, за Т мин - 1,57 × Т л.

В этом количестве содержится N колониеобразующих единиц (микробных клеток - спор, обрывков мицелия), а в 1 м3 воздуха содержится

Пример: за 30 мин седиментации выросло 12 колоний микроорганизма. В 1 м3 воздуха содержится

= 253 клетки

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма Penicillium vermiculatum PK -1 - продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа                                                             

Место отбора пробы                                                                     

Название лаборатории                                                                 

Юридический адрес организации                                              

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация кл/м3

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. ГОСТ 12.1. 005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2. ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Гост 12820 80 Гост 520 89 Гост 9833 73 Гост р 21 1101 2009 Гост р 6 30 2003 Квалификационный справочник должностей Коэффициент уплотнения щебня Общий журнал работ пример заполнения Позиционный допуск Размеры дорожных знаков Размеры под ключ гост Расход топлива Расчет экономической эффективности Технологическая карта Усадка песка при уплотнении