герб

ГОСТы

флаг

МУК 4.2.1070-01 Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента В-глюканазы в воздухе рабочей зоны

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма
Trichoderma longibrachiatum TW -1 - продуцента
b -глюканазы в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1070-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к. м. н. В. И. Бобровым (ВНЦ по безопасности биологически активных веществ).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения . 2

2. Характеристика штамма-продуцента b-глюканазы .. 2

3. Пределы измерений . 2

4. Метод измерений . 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы .. 2

6. Требования безопасности . 3

7. Требования к квалификации операторов . 3

8. Условия измерений . 3

9. Проведение измерений . 4

10. Вычисление результатов измерений . 4

11. Оформление результатов измерений . 4

Список литературы .. 5

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1070-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma longibrachiatum TW -1 - продуцента b -глюканазы в воздухе рабочей зоны

Методические указания

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма - Trichoderma longibrachiatum TW -1-продуцента b -глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма-продуцента b-глюканазы

Продуцент b -глюканазы Trichoderma longibrachiatum TW-1 относится к классу несовершенных грибов. Рост характерных колоний определяется на 5-6 сутки. На агаризованной среде СМ микроорганизм образует характерные колонии до 15 мм в диаметре с гладкой подошвой, не врастающие в агар, с волнистым краем, пушистым воздушным мицелием, который покрыт спорами белого и желтого цвета. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно ветвистые. Оптимальная температура роста 28-30 °С.

Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 5000 кл/м3, 3 класс опасности, пометка А.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента b -глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток (спор, фрагментов мицелия) продуцента b -глюканазы на поверхность плотной питательной среды СМ и подсчета выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма как результат продукции b -глюканазы на среде с окрашенной целлюлозой.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                             ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                                                             ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х 10                                                                                                             ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                             ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                                                                             ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл                                                                                                             ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                             ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                             ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                             ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                                             ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                                                                             ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Бенгальский розовый

Диметилсульфоксид

Спирт этиловый ректификат                                                                                                            ГОСТ 5962-67

Селективная среда для штамма-продуцента b -глюканазы

Состав среды: КН2Р O 4 - 1 г; MgS O4 × 7Н2O - 0,5 г; ( NH 4 )2 SO 4 - 5 г; целлюлоза порошковая в пересчете на сухое вещество - 5 г; глюкоза - 5 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар - 20 г;

вода дистиллированная - до 1000 мл.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента b -глюканазы в воздухе рабочей зоны соблюдают:

· правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

· правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

· требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

· положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения продуцента b -глюканазы воздух аспирируют при помощи аппарата Крогова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1- 10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента, а прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки.

На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо.

После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества колоний, выросших на 2-3 сутки после посева проб воздуха по зонам просветления, которые являются результатом образования целлюлаз на срезах с окрашенной целлюлозой в присутствии повышенного количества глюкозы.

Существенным признаком промышленных мутантов рода Trichoderma является пониженная катаболическая репрессия по сравнению с дикими мутантами Trichoderma . В то время как у диких штаммов глюкоза в концентрациях выше 0,02 г/л практически полностью подавляет образование целлюлаз в глубинной культуре, у промышленных мутантов подавление образования целлюлаз начинается при концентрациях глюкозы выше 1 г/л.

Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметил-сульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при 28-30 °С на 2 дня и затем при температуре 44 °С на 18 ч для образования вокруг колоний зон просветления.

Количественный учет микробных клеток штамма-продуцента b -глюканазы проводится методом подсчета зон просветления, образующихся вокруг колоний микроорганизма как результат продукции глюканазы на среде СМ с окрашенной целлюлозой.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:

 кл/м3, где

Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме:

Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Trichoderma longibrachiatum TW -1 в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа                                                              

Место отбора пробы                                                                       

Название лаборатории                                                                   

Юридический адрес организации                                                

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2. ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Гост 10704 91 Гост 15150 Гост 8240 97 Гост бетон Календарный план Момент затяжки болтов Периодичность технического обслуживания Плотность нефтепродуктов Рмг 29 99 Сварка арматуры гост Снип гаражи Состав рабочей документации Состав рабочей документации в строительстве Условные обозначения Швеллер сортамент