герб

ГОСТы

флаг

МУК 4.2.1068-01 Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток штамма-продуцента
тилозина Streptomyces fradiae БС-1
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1068-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны д. м. н. Ивановым Н. Г., к. б. н. Шеиной Н. И. (Российский государственный медицинский университет).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения . 2

2. Биологическая характеристика штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 и его гигиенический норматив . 2

3. Пределы измерений . 2

4. Метод измерений . 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы .. 3

6. Требования безопасности . 4

7. Требования к квалификации оператора . 4

8. Условия измерений . 4

9. Проведение измерений . 4

10. Вычисление результатов измерений . 5

11. Оформление результатов измерений . 5

Список литературы .. 5

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1068-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны

Методические указания

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля штамма Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе производственных помещений биотехнологических производств и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий научно-исследовательских институтов, работающих в области промышленной гигиены.

2. Биологическая характеристика штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 и его гигиенический норматив

Систематическое положение штамма-продуцента

Порядок                             Actinomycetales

Класс                                 Actinomycetes

Семейство                         Streptomycetaceae

Род                                     Streptomyces

Вид                                     fradiae

Штамм                               БС -1

Культуралъно-морфологические особенности штамма

Штамм Streptomyces fradiae БС-1 является облигатным аэробом, растет на различных питательных средах: СР-6, СР-15, Гаузе-1, Ваксмана путем инкубирования в термостате при температуре 28 °С. Продолжительность развития составляет 10-15 суток.

Четкие культурально-морфологические свойства штамма проявляются на агаризованной среде СР-15 на 3 день развития. На этой среде штамм образует 6 морфологических типов колоний, из которых наиболее характерный тип составляет более 70 %. Изучаемый штамм представлен округлыми колониями до 9 мм в диаметре (в зависимости от плотности посева). Белый воздушный мицелий образуется в центре колонии и по периферии в виде одной, реже двух концентрических окружностей, край колоний не опушен. Профиль изогнутый, поверхность шероховатая, неопушенные части колоний гладкие, блестящие, кремовые. Структура мелкозернистая, по краю неопушенной части однородная. Консистенция плотная, пигмент с обратной стороны колоний желтовато-коричневый.

Предельно допустимая концентрация Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/м3, пометка А, 3 класс опасности.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента тилозина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м3 при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод измерения концентрации штамма-продуцента Strepto - myces fradiae БС-1 основан на аспирации аппаратом Кротова микробных клеток (спор, обрывков мицелия) на поверхность плотной питательной среды СР-15 и подсчета выросших колоний, которые выявляются при задержке роста тест-культуры ( Bacillus subtilis ), происходящего вследствие диффузии в агар антибиотика, выделяемого штаммом-продуцентом Streptomyces fradiae БС-1.

При данном методе на чашке Петри после забора пробы может быть учтено до 50 колоний, т. к. большее количество колоний на чашке могут образовывать сливающиеся зоны лизиса, что приводит к занижению результатов.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.7. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                             ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                                                             ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Водяная баня или водяной термостат

Газовая горелка или спиртовка лабораторная

Чашки Петри

Петли бактериологические

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                             ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл                                                                                                             ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл                                                                                                                  ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                                  ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                                  ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                                  ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                                                  ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                                                                                  ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Среда СР-15, агаризованная питательная Среда для продуцента тилозина (состав в %: меласса - 0,5, крахмал - 0,5, соевая мука - 0,5, кукурузный экстракт - 0,5, ( NH 4 )2 S О4 - 0,1, NaCl - 0,1, MgSO 4 × 7Н2 O - 0,05. СаСО3 - 0,2, агар - 1,5. рН среды до стерилизации 7,0-7,2. Режим стерилизации 1,1-1,2 атм., 40-50 мин)

Агаризованная среда Хоттингера, рН 6,8-7,0

Спирт этиловый ректификат                                                                                                             ГОСТ 5962-67

Хлороформ

Тетрациклина гидрохлорид

Амфотерицин В для внутривенного введения

Тест-культура Вас. subtilis вариант Л2 музейный штамм, споры хранят в виде водной суспензии при температуре 4 °С.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Биовита и хлортетрациклина в воздухе рабочей зоны соблюдают:

· правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

· правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации приборов;

· требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);

· положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20±5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения концентрации Streptomyces fradiae БС-1 воздух производственных помещений аспирируют со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды СР-15 в чашку Петри, помещенную в аппарат Кротова.

Аппарат Кротова перед каждым отбором воздуха тщательно протирают спиртом. На подвижный диск устанавливают чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Крышку прибора закрывают. После отбора пробы воздуха и остановки диска открывают крышку прибора, снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. В период отбора проб воздуха крышку чашки Петри хранят в стерильном пакете из бумаги, полиэтилена или других стерильных емкостях.

Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны.

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием места, времени и условий отбора.

9.2. Выполнение анализа

Агаризованную среду СР-15 расплавляют и остужают до 50-60 °С. Затем добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде амфотерицин для инъекций из расчета 20 мкг на 1 л среды для подавления посторонней воздушной грибковой флоры, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 10 мл. Чашки с застывшей средой помещают в термостат при 37 °С на сутки, после чего проросшие чашки бракуют.

После отбора проб воздуха на чашки Петри в аппарате Кротова их помещают в термостат при температуре 28-30 °С на 48 ч.

После инкубации чашки помещают в вытяжной шкаф. На внутреннюю поверхность наливают 1,5 мл хлороформа, чашку с посевом вверх донышком вставляют в крышку так, чтобы выросшие колонии бактерий находились в парах хлороформа не менее 20-30 мин. Затем каждую чашку вынимают из крышки, выливают оставшийся хлороформ, снова закрывают крышками и переносят в бокс. Чашки оставляют в боксе на 2 ч при комнатной температуре для преддиффузии.

Затем чашки Петри заливают 5 мл агаризованной среды Хоттингера с тест-культурой Вас. subtilis вариант Л2 из расчета 3 х 107 споровых клеток на 1 мл среды (Государственная фармакопея СССР, изд. XI, 1989, с. 206).

Чашки Петри с застывшей средой Хоттингера донышком вверх помещают в термостат при 37 °С на сутки. По окончании инкубации, т.е. через 3 суток после отбора пробы воздуха производят подсчет зон задержки роста тест-культуры, которые соответствуют числу проросших клеток штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1. Учитывают зоны диаметром не менее 5 мм.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации микробных клеток Streptomyces fradiae БС-1 в 1 м3 воздуха производят по формуле:

, где

Х - количество микробных клеток в воздухе (1 м3);

П - число зон задержки роста тест-культуры, что соответствует числу колоний, выросших на чашке Петри;

Т - время забора пробы воздуха, мин;

В - скорость подачи воздуха, л/мин;

1000 - коэффициент перевода 1 л в 1 м3.

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа                                                           

Место отбора пробы                                                                   

Название лаборатории                                                                

Юридический адрес организации                                             

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2. ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

5. Государственная фармакопея СССР, 1989, изд. XI, с. 206.

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Виды сечения разрезы Гост 12821 80 Журнал нивелирования Испытание предохранительных Поясов Категории дорог Маркировка грузов Обязанности стропальщика Пуэ 6 издание Расход электроэнергии СП 42 102 2004 Свес кровли плоской полимерной Сортамент металлопроката Сортамент уголков Сто асчм 20 93 Технологические трубопроводы