герб

ГОСТы

флаг

МУК 4.2.1067-01 Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны

ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ГОСУДАРСТВЕННЫЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ПРАВИЛА И НОРМАТИВЫ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации клеток микроорганизма
Streptomyces cinnamonensis
НИЦБ 109 - продуцента монензина
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1067-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к.б.н. Бару Р.В., к.б.н. Лапчинской А.В. (Государственный научный центр по антибиотикам).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

1. Общие положения и область применения . 2

2. Характеристика штамма-продуцента монензина . 2

3. Пределы измерений . 2

4. Метод измерений . 2

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы .. 2

6. Требования безопасности . 3

7. Требования к квалификации операторов . 3

8. Условия измерений . 4

9. Проведение измерений . 4

10. Вычисление результатов измерений . 4

11. Оформление результатов измерений . 5

Список литературы .. 5

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1067-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации
клеток микроорганизма Streptomyces cinnamonensis
НИЦБ 109 - продуцента монензина
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109-продуцента монензина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 м3 воздуха.

Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования» и ГОСТ Р 8.563-96 «Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма-продуцента монензина

Микроорганизм Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 является продуцентом антибиотика монензина. Штамм растет на различных агаризованных и жидких средах. Культура образует цепочки спор, обычно прямые или слегка извилистые, с гладкой оболочкой. На твердой питательной среде ISP на 3 сутки роста при температуре 28 °С образует округлые радиально-складчатые морщинистые колонии с кремовым или сероватым налетом, фестончатым краем и выпуклым более темным центром, диаметром 1-2 мм. На шестые сутки инкубации размеры колонии достигают 3-5 мм, конфигурация и складчатость колоний не изменяется, образуется воздушный мицелий со спорами бежевато-серого цвета, в среду выделяет коричневый пигмент. Штамм устойчив к следующим антибиотикам: левомицетину (30 мкг/мл), линкомицину (15 мкг/мл), полимиксину М (100 мкг/мл), эритромицину (мкг/мл), тетрациклину (30 мкг/мл) и олеандомицину (15 мкг/мл). ПДКр.з. 3000 кл/м3.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента монензина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м3 воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента монензина на поверхность плотной питательной среды и подсчета выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                                 ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                                                                 ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х10                                                                                                                 ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                                 ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл                                                                                                                 ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл                                                                                                                 ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                                 ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                                 ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                                 ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                                                 ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                                                                                 ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Антибиотики : левомицетин, линкомицин, полимиксин М, эритромицин, тетрациклин, олеандомицин и нистатин

Спирт этиловый ректификат                                                                                                                  ГОСТ 5962-67

Селективная среда для штамма-продуцента

Среда ISP: Мальт-экстракт (Difco) - 1,5 %, дрожжевой экстракт (Difco) - 0,5 %, крахмал растворимый - 0,5 %, мел химический осажденный - 0,3 %, Бакто-агар (Difco) - 2,0 %, вода дистиллированная - 100 мл, рН 7,2-7,4.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток продуцента монензина в воздухе рабочей зоны соблюдают:

· правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88;

· правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

· положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения продуцента монензина воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.

Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний выросших на 3-6-е сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.

Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор одного из антибиотиков (левомицитин, линкомицин, цефалотин или другой, указанные в разделе 2) для подавления посторонней бактериальной микрофлоры и нистатина (10 мкг/мл) для подавления грибковой флоры, тщательно перемешивают и разливают по 10-15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри помешают в термостат при 28 °С. Через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м3 воздуха производят по формуле:

 кг/м3, где

Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;

N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;

1000 - коэффициент пересчета на 1 м3 воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

В случае невозможности использования аппарата Кротова рекомендуется применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 60 мин. При этом пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента:

эмпирически установлено, что за 5 мин на площадь 100 см2 оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, за 1 мин - 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 см2.

Составляем пропорцию:

на 100 см2 за 1 мин оседает 2 л воздуха

на 78,54 см2                   -        Х л

                             Х= 1,57 л/мин.

Следовательно, на стеклянную чашку Петри за 1 мин оседает количество бактерий, содержащееся в 1,57 л воздуха.

Надо определить количество клеток в 1 м3 воздуха. На 1 чашку (диаметр 100 мм) за 1 мин оседает количество микробов, содержащееся в 1,57 л воздуха, за Т мин - 1,57 × Т л.

В этом количестве содержится N колониеобразующих единиц (микробных клеток - спор, обрывков мицелия), а в 1 м3 воздуха содержится

Пример: за 30 мин седиментации выросло 12 колоний микроорганизма. В 1 м3 воздуха содержится

=253 клетки

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа штамма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа                                                        

Место отбора пробы                                                                

Название лаборатории                                                            

Юридический адрес организации                                         

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл/м3

Ответственный исполнитель

Научный руководитель

Список литературы

1. ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

2. ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).

4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).

Еще документы скачать бесплатно

Интересное

Автобусные Остановки Гост 17199 88 Гост 27902 88 Единицы физических величин Железобетонные водоотбойные плиты Маршрутная карта Накладные расходы Обозначение насоса на схеме Общий журнал работ пример заполнения Плотность газа Пропускная способность трубы Расстояние между пешеходными переходами гост Рельс р50 СП 52 101 2003 Санпин столовая